Polimorfismos de los genes calpastatina, IGF1, leptina, y calpaína como indicadores de terneza de la carne ovina.

Abstract

La presente tesis se compone de la introducción general, revisión de literatura y 4 artículos que conforman el total de la investigación, además de conclusiones y recomendaciones generales. El Capítulo 1 consiste en una revisión bibliográfica dada la circunstancia de la utilización de marcadores moleculares relacionados con la producción y calidad de la carne en ovinos. Se realizó una revisión exhaustiva de artículos científicos en los cuales se ha reportado los avances genéticos a través del uso de marcadores moleculares (Web Science, Scopus, Cab Abstract, PubMed), los cuales están relacionados a una mayor productividad de carne y la calidad de la misma. El capítulo 2 consiste en la estandarización de un método de extracción de DNA de sangre de ovinos, mediante la utilización de una lisozima bacteriana. En este capítulo se describe la modificación de un método de extracción de DNA en sangre mediante la utilización de una lisozima bacteriana empleada únicamente en bacterias Gram negativas las cuales, debido a su doble membrana, imposibilita el acceso al DNA mitocondrial. Considerando que el método de extracción de Bromuro de hexadeciltrimetilamonio (CTAB) no ha tenido los resultados óptimos de pureza y concentración del material genético (DNA), la adición de la lisozima mejora de manera notable los parámetros de pureza y concentración del DNA de las células provenientes de tejido y sangre animal, resultando adecuados para pruebas sensibles y específicas como lo son la reacción de cadena de la polimerasa (PCR) y Secuenciación. El Capítulo 3 consiste en el estudio de una población de ovinos, con la finalidad de identificar los polimorfismos de los genes Calpastatina (CAPN316) y Calpaína (CAST1), relacionadas por sus recombinaciones genéticas con la terneza y calidad de la carne; así como, el desarrollo de un estudio genético poblacional para identificar individuos dominantes que han sido relacionados con la terneza de la carne en ovinos. Se utilizó una población de 300 ovinos pertenecientes a un hato, y mediante la técnica de polimorfismo de conformación de cadena simple (SSCP) se determinó el análisis de población, observando la distribución de heterocigocidad, identificación de polimorfismos, distribución de dominancia y recesividad de los genes CAST1 y CAPN316. En el capítulo 4 se discute la variabilidad genética e identificación de haplotipos en seis razas de ovinos especializadas en la producción de carne, así como la identificación de polimorfismos de los genes IGF1 (Factor de crecimiento insulínico tipo 1), LEP271 (Leptina-271) y LEP245 (Leptina-245). La secuenciación y estudio de los polimorfismos detectados en animales sobresalientes generó datos para poder realizar un estudio poblacional y la construcción de una red de haplotipos con individuos muestreados en otras latitudes y que fueron registrados en el banco mundial de genes (GenBank). _______________ GENETIC VARIABILITY OF THE GENES IGF1, LEPTINE CALPAINE AND CALPASTATINE IN SHEEP FROM MEAT. ABSTRACT: This thesis is made up of the general introduction, literature review and 4 articles that make up the total research, in addition to general conclusions and recommendations. Chapter 1 consists of a bibliographic review given the circumstance of the use of molecular markers related to the production and quality of meat in sheep. An exhaustive review of scientific articles was carried out in which genetic advances have been reported through the use of molecular markers (Web Science, Scopus, Cab Abstract, PubMed), which are related to higher meat productivity and the quality of the same. Chapter 2 consists of the standardization of a method of extracting DNA from sheep blood, using a bacterial lysozyme. This chapter describes the modification of a blood DNA extraction method using a bacterial lysozyme used only in Gram negative bacteria which, due to their double membrane, make access to mitochondrial DNA impossible. Considering that the extraction method of Hexadecyltrimethylammonium Bromide (CTAB) has not had the optimal results of purity and concentration of the genetic material (DNA), the addition of lysozyme significantly improves the purity and concentration parameters of the DNA of the cells from animal tissue and blood, making it suitable for sensitive and specific tests such as polymerase chain reaction (PCR) and sequencing. Chapter 3 consists of the study of a population of sheep, in order to identify the polymorphisms of the Calpastatin (CAPN316) and Calpain (CAST1) genes, related by their genetic recombination with tenderness and meat quality; as well as the development of a population genetic study to identify dominant individuals that have been related to the tenderness of meat in sheep. A population of 300 sheep belonging to a herd was used, and the population analysis was determined using the single chain conformation polymorphism (SSCP) technique, observing the distribution of heterozygosity, identification of polymorphisms, dominance distribution and recessivity of the CAST1 and CAPN316 genes. Chapter 4 discusses genetic variability and haplotype identification in six specialized sheep breeds in meat production, as well as the identification of polymorphisms of the IGF1 (Insulin Growth Factor Type 1) genes, LEP271 (Leptin-271). and LEP245 (Leptin-245). The sequencing and study of the polymorphisms detected in outstanding animals generated data to carry out a population study and the construction of a haplotype network with individuals sampled in other latitudes and which were registered in the World Gene Bank (GenBank).