Polisonda para detectar MPVd, PepMV y Clavibacter michiganensis subsp michiganensis en el cultivo de jitomate (Solanum lycopersicum L).

Abstract

El cultivo de jitomate (Solanum lycopersicon L.) es hospedante de diferentes patógenos, entre los cuales el viroide de la papita mexicana (Mexican papita viroid, MPVd), el virus del mosaico del pepino (Pepino mosaic virus, PepMV) y la bacteria Clavibacter michiganensis subsp. michiganensis (Cmm) pueden ocasionar pérdidas hasta del 100% de la producción. En México sólo existe un reporte de la presencia del MPVd en jitomate cultivado en condiciones de invernadero en el estado de México, en tanto que Cmm y el PepMV se han detectado en Querétaro y Jalisco. on la presente investigación se desarrolló una polisonda (poli-3) para detectar de manera simultánea, mediante hibridación molecular no radioactiva, al MPVd, PepMV y Cmm. Se comparó la sensibilidad de las sondas individuales para detectar a cada uno de estos tres patógenos con respecto de la poli-3 y no hubo diferencias entre ellas. La impresión directa de savia del pedicelo de hojas de jitomate infectadas sobre la membrana permitió la detección del virus y del viroide, pero no de la bacteria. Al comparar el límite de sensibilidad de la sonda de Cmm con PCR de punto final, utilizando ADN total de plantas de jitomate infectadas así como de UFC, se encontró que la PCR fue 100 veces más sensible que la hibridación. La sonda de Cmm fue específica a esta especie y no hibridó con el ADN de otras bacterias fitopatógenas. Finalmente, se analizaron muestras de jitomate, colectadas en campo de diferentes localidades productoras, mediante hibridación con la poli-3 y PCR de punto final obteniendo los mismos resultados, por lo que la primera técnica puede ser usada como método de diagnóstico masivo para los tres patógenos. _______________ POLIPROBE TO DETECT MPVd, PepMV AND Clavibacter michiganensis subsp. michiganensis IN TOMATO CROP (Solanum lycopersicum L.). ABSTRACT: The tomato (Solanum Lycopersicon L.) crop is a host of different pathogens, like Mexican papita viroid (MPVd), Cucumber mosaic virus (PepMV) and Clavibacter michiganensis subsp. michiganensis (Cmm). These pathogens can cause losses of almost 100% of production. In Mexico there is only one report of MPVd in tomatoes grown under greenhouse conditions located in state of Mexico, and Cmm and PepMV have been detected in Queretaro and Jalisco. In this research, a poliprobe (poly-3) was generated to detect at the same time MPVd, PepMV and Cmm using nonradioactive molecular hybridization. We did not detect any difference between the sensitivity of the individual probes respect to the poly-3. The printing of infected tomato leaves on the membrane allowed the detection of the virus or viroid, not bacteria. Respect to the bacteria, we compared PCR and hybridization sensitivity limits. We found that conventional PCR, using total ADN from infected tomato plants and CFU, is 100 times more sensitive than hybridization. We tested the specificity of Cmm probe and we did not observed any hybridization signal with ADN of other plant pathogenic bacteria. Finally, to test the effectivity of the poly-3, we collected field samples of tomato plants from different production areas. We analyzed those samples by hybridization and by conventional PCR, and we got the same results either using the poly-3 or PCR. So, we have shown that hybridization using the poly-3 can be used as method of massive diagnostic for the three analyzed pathogens, which includes one bacterium, one virod and one virus.