Inoculación por biobalística del Avocado sunblotch viroid en aguacate.

Abstract

El Avocado sunblotch viroid causa la “Mancha de Sol” e importantes pérdidas económicas en la producción y calidad del aguacate en México. A la fecha, no se cuenta con algún método alternativo para su inoculación que sea comparable con la transmisión mecánica por injerto, y ventajosamente útil para profundizar en diversos estudios de interacción aguacate-ASBVd. En esta investigación se empleó la biobalística como una opción para la inoculación del ASBVd en hojas de aguacate ‘Hass’. Se evaluó la presión de disparo con ensayos de expresión transitoria del gen reportero gusA y el uso de extractos de ácidos nucleicos totales con el ASBVd como fuente de inóculo. Los resultados indicaron que 200 lb·pulg-2 es la presión óptima con el mayor número de eventos de expresión transitoria de gusA (promedio transformado de 15.07 focos azules por sección de hoja bombardeada, P = 0.05, DMS = 3.0). A esta presión de disparo ocurrió la transmisión exitosa del ASBVd contenido en extractos de ácidos nucleicos totales de hojas de aguacate. Estos hallazgos demuestran que la biobalística es un método para la inoculación del ASBVd en tejido foliar de aguacate y que los extractos de ácidos nucleicos totales con el viroide sirven como fuente de inóculo en ensayos de transmisión. Las implicaciones de esta nueva estrategia de transmisión del ASBVd se discuten en este documento. Para nuestro conocimiento, este estudio representa el primer esfuerzo exitoso del uso de la biobalística para la inoculación del ASBVd en tejido foliar de aguacate ‘Hass’. _______________ BIOLISTIC INOCULATION OF Avocado sunblotch viroid ON AVOCADO. ABSTRACT: Avocado sunblotch viroid causes Sunblotch disease and important losses on avocado yield and quality in Mexico. There is not an inoculation method similar to graft transmission which could allow studies on avocado-ASBVd interactions. In this study particle bombardment or biolistics was used as an alternative method for ASBVd inoculation on leaves of avocado ‘Hass’. Shooting pressure was optimized by transient expression assays with gusA on leaves, and the optimized pressure was used to evaluate if extracts of total nucleic acids from avocado leaves ASBVd-infected could serve as viroid inoculum in transmission tests. The optimized shooting pressure with the highest number of transient expression events (transformed average of 15.07 blue foci per leaf section bombarded, P = 0.05, LSD = 3.0) was 200 pounds per square inch. This pressure also resulted in a successful transmission of ASBVd on avocado leaves, as evidenced by RT-PCR tests. Biolistic inoculation of total nucleic acids extracts with ASBVd is an alternative method for experimental transmission of this viroid on avocado leaves. The implications of this new transmission strategy of ASBVd in avocado are discussed in this document. To our knowledge, this is the first report of biolistic inoculation of ASBVd on leaves of avocado ‘Hass’.