Regeneración in vitro de Stevia rebaudiana Bertoni: medios de cultivo y condiciones de incubación.

Abstract

Las hojas Stevia rebaudiana Bertoni contienen azúcares no calóricos conocidos como steviolglicósidos, que pueden ser de 100 hasta 300 veces más dulces que la sacarosa. Una alternativa para cubrir la demanda de planta genéticamente uniforme y con sanidad vegetal es la propagación in vitro; sin embargo, el éxito de este método radica en optimizar el medio de cultivo y las condiciones de incubación. El objetivo de esta investigación fue obtener la combinación óptima entre medio de cultivo y condición de incubación para la regeneración in vitro de stevia. Se cultivaron segmentos nodales en Murashige y Skoog al 50 y 100 % y solución Steiner al 100, 200 y 300 % de concentración y dos condiciones de incubación [140 µmol m-2 s-1 densidad de flujo de fotones fotosintéticos (DFFF) + 28± 2 °C y 80 µmol m-2 s-1 DFFF + 26 ± 2 °C]. Los explantes cultivados en MS 50 % y 80 µmol m-2 s-1 DFFF + 26 ± 2 °C mostraron mayor supervivencia, número y longitud de brotes, número de hojas y menor porcentaje de oxidación y vitrificación, comparados con MS 100 % y 80 µmol m-2 s-1 DFFF + 26±2 °C. La solución Steiner al 200 y 300 % combinadas con 140 µmol m-2 s-1 DFFF + 28 ± 2 °C resultaron en los valores más altos de supervivencia, número y longitud de brotes y número de hojas comparadas con 100 % de solución Steiner y 140 µmol m-2 s-1 DFFF + 28±2 °C. El mejor periodo para obtener segmentos nodales para la propagación in vitro de stevia es durante la etapa vegetativa de las plantas madre, que corresponde a los meses de abril a julio. Se concluye que las condiciones de cultivo más propicias para la regeneración in vitro de stevia a partir de segmentos nodales consisten en el uso del medio MS al 50 % en combinación con 80 µmol m-2 s-1 DFFF y 26±2 °C. _______________ IN VITRO REGENERATION OF Stevia rebaudiana BERTONI: CULTURE MEDIUM AND INCUBATION CONDITIONS. ABSTRACT: Leaves of stevia (Stevia rebaudiana Bertoni) contain non-caloric sugars known as steviosides, which can be 100 to 300 times sweeter than sucrose. In vitro propagation is an alternative to produce plant material with genetic uniformity and plant health for field establishment. However, success of this method depends on culture medium and incubation conditions. The objective of this research was to find the optimum combination of culture medium and incubation conditions for the in vitro regeneration of stevia. Nodal segments were cultivated under different concentrations of the Murashige and Skoog (MS, 50 and 100 %) and Steiner (100, 200 and 300 %) nutrient solutions, and two incubation conditions [140 μmol m-2 s-1 photosynthetic photon density flux (PPDF) and 28 ± 2 °C and 80 μmol m-2 s-1 PPDF and 26 ± 2 °C]. Explants cultivated in MS medium at 50 % and 80 μmol m-2 s-1 PPDF and 26 ± 2 °C showed greater survival rate, shoot number per explant, shoot length, and number of leaves, and lower oxidation and vitrification rates compared to 100 % MS medium and 80 μmol m-2 s-1 PPDF and 26 ± 2 °C. The 200 and 300 % Steiner nutrient solution and 140 μmol m -2 s -1 PPDF and 28 ± 2 °C promoted the greatest values for explant survival rate, shoot number, shoot length of and number of expanded leaves compared to Steiner 100% and 140 μmol m -2 s -1 PPDF and 28 ± 2 °C. The best period for harvesting nodal segments from the mother plants is during the vegetative phase, which occurs from April to July. The best combination for in vitro regeneration of stevia using nodal segments are 50 % MS medium and 80 μmol m-2 s-1 PPDF and 26 ± 2 °C.