Morfogénesis in vitro De Bletia purpurea var purpurea (Lam) DC.

Abstract

Bletia purpurea var. purpurea es una orquídea terrestre con potencial ornamental. La tasa baja de germinación in situ, el lento crecimiento, así como actividades antropocéntricas que modifican sus hábitats son factores que ponen en riesgo las poblaciones nativas de esta especie y a la mayoría de los miembros de la familia Orchidaceae. El objetivo de esta investigación fue establecer un protocolo de regeneración in vitro vía organogénesis directa. El establecimiento exitoso del cultivo aséptico se logró al tratar a las semillas con una solución de Tween® 20 (1%; 10 min), Benlate® + Captan® (8 g L-1 c/u; 30 min), H2O2 (3%; 60 min), NaOCl +plata coloidal (15% + 10%; 15 min). La germinación fue de 100% a los 33 días en medio MS sin vitaminas, adicionado con sacarosa (30 g L-1). Los discos de pseudobulbo disecados de las plántulas germinadas in vitro fueron los mejores explantes para la inducción de brotes, ya que produjeron después de cuatro semanas de cultivo 1.4 brotes por explante cuando fueron cultivados en medio MS (50% de sales), sacarosa (20 g L-1), carbón activado (1g L-1), y la combinación de citocininas [KIN (1.9 mg L-1), BA (1–3 mg L-1)], con auxinas [ANA (0.5–1 mg L-1) y AIA (0.54–0.93 mg L-1)]. En la fase de multiplicación se logró incrementar la tasa de proliferación de propágulos a 2.3 brotes por explante, cuando estos fueron subcultivados por tres semanas en medio MS adicionado con sacarosa (30 g L-1), carbón activado (1 g L-1), BA (1–3 mg L-1) y ANA (0.5–1 mg L-1). La producción de raíces adventicias para el enraizamiento de brotes fue del 100% a las cuatro semanas en el medio MS a la mitad de sales adicionado con sacarosa (20 g L-1) y AIB (2 y 2.5 mg L-1). El porcentaje de supervivencia fue de 100%. El protocolo de regeneración obtenido aporta conocimiento básico sobre la propagación in vitro de una orquídea mexicana y es una opción para el rescate y conservación de la especie. _______________ In vitro MORPHOGENESIS OF Bletia purpurea var. purpurea (LAM.) DC. ABSTRACT: Bletia purpurea var. purpurea is a terrestrial orchid with ornamental potential. The low rate of in situ germination, slow growth rates, and anthropocentric activities, which disturb natural habitats, are factors threatening the native populations of this species as well as most members of the Orchidaceae. The objective of this research was to establish an in vitro protocol for plant regeneration via direct organogenesis for this orchid. The establishment of the aseptic cultures was successful when the seeds were processed with a particular treatment including a series of immersions in different solutions including Tween® 20 (1%; 10 min), Benlate® + Captan® (8 g L-1 each; 30 min), H2O2 (3%; 60 min) NaOCl + colloidal silver (15% + 10%; 15 min). Germination was 100% after 33 days of seed inoculation on MS medium without vitamins added with sucrose (30 g L-1). The pseudobulb discs dissected from germinated seedlings were the best explants for shoot induction since they produced 1.4 shoots per explant after been cultured on MS medium (50% salts), sucrose (20 g L-1), activated charcoal (1g L-1), and the combination of cytokinins [KIN (1.9 mg L-1) or BA (1-3 mg L-1)] and auxins [ANA (0.5-1 mg L-1), and AIA (0.54-0.93 mg L-1)] for four weeks. During proliferation, we established the conditions to increase the propagule multiplication rate to 2.3 shoots per explants after three weeks of culture in MS medium supplemented with sucrose (30 g L-1), activated carbon (1g L-1), BA (1-3 mg L-1), and ANA (0.5-1 mg L-1). Adventitious root formation was produced in 100% of explants after four weeks of incubation in MS medium with half strength of the original mineral formulation supplemented with sucrose (20 g L-1) and AIB (2 and 2.5 mg L-1). The survival rate of rooted plants was 100%. The micropropagation protocol obtained in this study provides the fundamentals to propagate this mexican orchid and may be considered a new propagation option in rescue and conservation programs.