Determinación morfométrica-molecular de una población aberrante de Brevipalpus californicus y su papel como vector de Citrus leprosis virus (CiLV-C y OFV-citrus).

Abstract

Se realizó la caracterización morfométrica y molecular de la población aberrante de Brevipalpus californicus y se determinó su capacidad de adquirir e inocular los virus de la leprosis de los cítricos tipos citoplasmático (CiLV-C) y nuclear (OFV-citrus). Para la parte morfométrica, se realizó un estudio fotográfico con las especies la población aberrante de B. californicus, designada como Brevipalpus sp. (Tetipac) por su sitio de colecta, B. californicus (designados como “Texcoco”, procedentes de una población fundada a partir de una hembra colectada en Texcoco, México), B. lewisi y B. californicus, las dos últimas con ejemplares de sus respectivas series tipo. En ejemplares de cada una de estas especies se midieron 37 características morfométricas y se compararon por análisis univariado y multivariado (componentes principales). En el estudio molecular se utilizaron ejemplares de la población aberrante de Brevipalpus sp. (Tetipac) y B. californicus (Texcoco). Se amplificaron por PCR dos segmentos del gen COI de 339 pb (iniciadores DNF/DNR) y 650 pb (iniciadores LCOI/HCOI), así como un segmento del gen 28S (iniciadores D23F-D6R). Con las secuencias obtenidas se construyeron árboles de filogenia por el método Neighbor-Joining. Las pruebas de adquisición de CiLV-C y OFV-citrus se realizaron con larvas, ninfas y hembras adultas (15 ácaros por repetición en 10 repeticiones por estadio), confinadas durante periodos de 24, 48 y 72 h en hojas de naranja con positivas a leprosis citoplasmática o nuclear. Las pruebas de transmisión se llevaron a cabo en Cárdenas, Tabasco (CiLV-C) y en Tolimán, Querétaro (OFV-citrus), México. En este estudio, 25 ácaros (todos los estadios) fueron confinados durante 48-120 h en hojas de naranja infectadas con CiLV-C u OFV-citrus y posteriormente fueron transferidos a plántulas de Arabidopsis thaliana, Phaseolus vulgaris o Citrus sinensis var. Valencia. La detección de dichos virus se realizó mediante RT-PCR con los iniciadores MPF/MPR (CiLV-C) y CiLV-N-NPF/CiLVN-NPR (OFV-citrus). En la caracterización morfométrica solo 17 características fueron significativamente diferentes entre especies, según el análisis univariado. El análisis multivariado mostró que la población aberrante de Brevipalpus sp. (Tetipac) y B. californicus (Texcoco) no son entidades separadas. La caracterización molecular mostró que Brevipalpus sp. (Tetipac) es un linaje cercano a B. californicus sensu lato. En dos repeticiones hubo adquisición de CiLV-C, mientras que en OFV-citrus se obtuvieron 84 resultados positivos. En plantas indicadoras de A. thaliana y P. vulgaris no se observaron síntomas luego de la infestación con la población aberrante de Brevipalpus sp. (Tetipac) infectados con OFV-citrus. En plantas de C. sinensis mantenidas en Tolimán, Querétaro, se observaron síntomas asociados con OFV-citrus. Sin embargo en ningún caso este virus fue detectado por RT-PCR. _______________ MORPHOMETRIC-MOLECULAR DETERMINATION OF AN ABERRANT POPULATION OF Brevipalpus californicus AND ITS ROLE AS VECTOR OF Citrus leprosis (CiLV-C AND OFV-citrus). ABSTRACT: A morphometric and molecular characterization of the aberrant population of Brevipalpus californicus was conducted, and its capacity to acquire and inoculate citrus leprosis viruses cytoplasmic (CiLV-C) and nuclear (OFV-citrus) was determined. For the morphometric study, a photographic study the aberrant population of B. californicus, named Brevipalpus sp. (Tetipac) because of its collection site, B. californicus (designed as “Texcoco”, proceeding from a colony initiated by a single female collected in Texcoco, Mexico), B. lewisi and B. californicus, the last two with specimens from their respective type series. From specimens of each species, 37 morphometric characters were measured and compared by univariate and multivariate analysis (principal components). In the molecular study, specimens Brevipalpus sp. (Tetipac) and B. californicus (Texcoco) were used. Two segments of the COI gen were amplified by PCR, 339 bp (primers DNF/DNR) and 650 bp (LCOI/HCOI), as well as a segment of the 28S gen (primers D23F-D6R). With the obtained sequences, phylogenetic trees were constructed by the Neighbor-Joining test. For the acquisition tests of the viruses CiLV-C and OFV-citrus larvae, nymphs and adult females were used, 15 specimens per replicate, 10 replicates per stage; they were confined during periods of 24, 48 or 72 h on orange leaves with symptoms of cytoplasmic or nuclear leprosis. The citrus to citrus inoculation was carried out in Cárdenas, Tabasco (CiLV-C) and in Tolimán, Querétaro (OFV-citrus), both in Mexico. In this study, 25 mites (all the stadia) were confined during 48-120 h on orange leaves infected by CiLV-C or OFV-citrus and then transferred to Arabidopsis thaliana, Phaseolus vulgaris or Citrus sinensis var. Valencia seedlings. To diagnose these viruses, the primers MPF/MPR (CiLV-C) and CiLV-N-NPF/CiLVN-NPR (OFV-citrus) were used. The morphometric characterization showed that only 17 characters were significantly different among species, after univariate analysis. The multivariate analysis showed that Brevipalpus sp. (Tetipac) and B. californicus (Texcoco) are not separate entities. The molecular characterization showed that Brevipalpus sp. (Tetipac) is a strain close to B. californicus sensu lato. In the acquisition tests, only two replicates were positive to CiLV-C, whereas for OFV-citrus 84 replicates were positive. In the inoculation tests, symptoms did not appear in the indicator plants A. thaliana and P. vulgaris after infestation of Brevipalpus sp. (Tetipac) infected with OFV-citrus. Only on C. sinensis at Tolimán, Querétaro, symptoms associated to OFV-citrus were observed. In no case this virus was detected by RT-PCR.