Uso de activadores en la producción de esteviósidos a partir de células en suspensión de Stevia rebaudiana Bertoni

Abstract

Stevia rebaudiana Bertoni produce glucósidos conocidos como esteviósidos y han aumentado su demanda. Las técnicas biotecnológicas se utilizan como una alternativa para aumentar la producción de estos compuestos. El objetivo de este estudio fue determinar el efecto de activadores en la síntesis de esteviósidos en los callos de S. rebaudiana. Para cumplir con este objetivo, se cultivaron segmentos de hoja y nudos (explantes) en el medio nutritivo de Murashige y Skoog (MS) que contenía diferentes concentraciones y combinaciones de reguladores del crecimiento (bencilaminopurina, ácido 2,4-diclorofenoxiacético, ácido naftaleno acético y ácido 4-fluorofenoxiacético). Los callos obtenidos de segmentos de hojas se cultivaron en un medio que contenía ácido salicílico (10 y 100 mM), metil jasmonato (10 y 100 mM), ácido cítrico (200 mg L-1), ácido ascórbico (100 mg L-1), 2,4 -ácido diclorofenoxiacético (1.5 mg L-1) y bencilaminopurina (1.5 mg L-1), bajo luz roja, azul o blanca durante 24 h, a 25 o 28 ° C. Concentraciones de 1.5 mg L-1 de BAP y 2,4-D produjeron el mayor número de callos friables y muy baja oxidación fenólica en explantes de hojas. Los callos cultivados a 28 °C o con 100 mM de ácido salicílico aumentaron su producción de esteviósido en 9.8 veces en comparación con la de las hojas de plantas cultivadas en condiciones de invernadero. La concentración de rebaudiósido A exhibió los valores más altos (34.6 veces más altos que en las hojas) mediante la aplicación de 10 mM de ácido salicílico. La acumulación de esteviol se dio en presencia de antioxidantes y reguladores del crecimiento y combinando 100 mM de ácido salicílico con 28 °C. El ácido salicílico, ciertos tipos de antioxidantes exógenos, reguladores del crecimiento y la temperatura pudieron promover la acumulación de esteviósidos. _______________ ELICITORS ON STEVIOSIDES PRODUCTION IN Stevia rebaudiana Bertoni CALLI. ABSTRACT: Stevia rebaudiana Bertoni produces glycosides known as steviosides and they have increased their demand. Biotechnological techniques are used as an alternative to increase the production of these compounds. The aim of this study was to determine the effect of elicitors on the synthesis of steviosides in the calli of S. rebaudiana. To meet this goal, leaf segments and nodes (explants) were grown in the nutrient medium of Murashige and Skoog (MS) that contained different concentrations and combinations of growth regulators (benzylaminopurine, 2,4-dichlorophenoxyacetic acid, naphthalene acetic acid and 4-fluorophenoxyacetic acid). Calli obtained from leaf segments were cultured on medium containing salicylic acid (10 and 100 mM), methyl jasmonate (10 and 100 mM), citric acid (200 mg L-1), ascorbic acid (100 mg L-1), 2,4-dichlorophenoxyacetic acid (1.5 mg L-1), and benzylaminopurine (1.5 mg L-1), under red, blue or white light for 24 h, at 25 or 28 °C. Concentrations of 1.5 mg L-1 of BAP and 2,4-D produced the highest number of friable calli and very low phenolic oxidation in leaf explants . The calli cultivated at 28 °C or with 100 mM of salicylic acid increased their stevioside production by 9.8 times compared to that of the leaves of plants grown under greenhouse conditions. The concentration of rebaudioside A exhibited the highest values (34.6 times higher than in leaves) by applying 10 mM of salicylic acid. The accumulation of steviol was given in the presence of antioxidants and growth regulators and combining 100 mM of salicylic acid with 28 ° C. Salicylic acid, certain types of exogenous antioxidants, growth regulators and temperature may promote the accumulation of steviosides.