Evaluación de tamaños de muestra de semilla de trigo para determinar su capacidad predictiva de fitopatógenos

Abstract

Las pruebas de sanidad de semillas se realizan generalmente a partir de muestras obtenidas de un lote de semillas. La muestra a analizar deberá ser lo más homogénea posible y representativa del lote; cuando la distribución de las semillas contaminadas e infectadas es relativamente homogénea, el tamaño de muestra a obtener no es restrictivo. Si la distribución es heterogénea se requerirá de un mayor número de muestras en contraste con las condiciones homogéneas señaladas anteriormente. Por lo anterior el objetivo del presente estudio fue evaluar el efecto de reducir la intensidad de muestreo actual (10%) utilizada en los análisis para detectar en semilla de trigo los virus: Virus del mosaico estriado del trigo (WSMV, por sus siglas en inglés) y Virus mosaico estriado de la cebada (BSMV, por sus siglas en inglés), con la finalidad de reducir tiempos, costos, y material, pero sin disminuir la confiabilidad y precisión de los resultados de dichos análisis. Para la detección del virus WSMV se formaron muestras simples (MS) con 10 g de semilla infectada de trigo harinero (Triticum aestivum) las cuales se mezclaron con 90 g de semilla sana. En total se prepararon 32 MS con nivel de infección (NI) de 10% a partir de las cuales se generaron los tamaños de muestra (TM): 20, 15, 10, 8, 6 y 4%, y se estableció la prueba ELISA con muestras de harina obtenidas de 2 g de semilla de cada MS. Para la detección del virus BSMV, a partir de dos lotes de semilla de trigo, uno naturalmente infectado con el virus BSMV y otro de semilla sana, se formaron tres sublotes de 50 g con 15, 10 y 5 % de nivel de infección (NI), y 210 muestras simples (MS) de 20 g, de las cuales 70 fueron con 15% de NI, 70 con 10% de NI, y las restantes 70 con 5% de NI. A partir de las MS se formaron tamaños de muestra (TM) de 15,10 y 5 % con diferente NI, que dan origen a 36 muestras compuestas (MC) formadas con 25, 20, 15 y 10 MS. Se estableció la prueba con muestras de harina proveniente de 2 g de semilla de cada sublote, MS y MC. Ambas pruebas se establecieron en placas de poliestireno de 96 pozos y los reactivos y protocolos empleados fueron de AGDIA®, DAS ELISA (2013) para los virus WSMV y BSMV. Los resultados obtenidos en este estudio indicaron que el aumento y la reducción del tamaño de muestra actual de 10% afectó significativamente (α= 0.05) la sensibilidad de la prueba ELISA para la detección de los virus WSMV y BSMV en muestras de trigo harinero. La sensibilidad de la prueba al virus WSMV fue baja cuando se analizaron las MS con todos los TM de 20, 15, 8, 6 y 4 % y nivel de infección (NI) de 10%. Lo anterior indica que el NI natural de la semilla de trigo es un factor importante a considerar para la detección del virus WSMV por la prueba ELISA. Mientras que los resultados obtenidos para la detección del virus BSMV mostraron que al disminuir el NI por debajo del 15% en los sublotes, MS y MC, se afecta significativamente (α= 0.05) la sensibilidad de la prueba ELISA al virus. Así mismo la sensibilidad de la prueba se ve afectada significativamente (α= 0.05), conforme disminuye el número de MS que forman una MC (<15 MS), y el tamaño de muestra. Se concluye que el nivel de infección natural de la semilla de trigo en sublotes, muestras simples y muestras compuestas es un factor importante a considerar para la detección del virus BSMV por la prueba ELISA. Similarmente, para la detección de este virus se debe también tener presente el número de muestras y el tamaño de la muestra con la que se vaya a formar la muestra compuesta. _______________ EVALUATION OF SAMPLE SIZES WHEAT SEED TO DETERMINE ITS PREDICTIVE ABILITY OF PHYTOPATHOGENIC. ABSTRACT: The seed health tests are usually performed on samples obtained from a seed lot. The test sample should be as homogeneous as possible and representative of the lot; when the distribution of contaminated and infected seeds is relatively homogeneous, the sample size is not restrictive to obtain. If the distribution is heterogeneous will require a greater number of samples in contrast to the homogeneous one. Therefore the goal of this study was to evaluate the effect of reducing the intensity of current sample (10%) used in the analysis for detect viruses in wheat seed: Wheat streak mosaic virus (WSMV) and Barley stripe mosaic virus (BSMV), in order to reduce time, cost, and materials, without compromising the reliability and accuracy of the results for the analyzed virus. For detection of virus WSMV single samples (SiS) they were formed with 10 g of seed infected bread wheat (Triticum aestivum) which were mixed with 90 g of healthy seed. In total 32 MS were prepared with level of infection (LI) 10% from which the sample sizes (SaS) were formed: 20, 15, 10, 8, 6 and 4%, and the ELISA test was established with wheat flour samples obtained from 2 g of seed from each SiS. BSMV for detecting viruses from two wheat seed lots, one naturally infected with BSMV and other healthy seed three sublots of 50 g were formed with 15, 10 and 5% level of infection (LI ), and 210 single samples (SiS) of 20 g, of which 70 were 15% LI, 70 to 10% of LI, and the remaining 70 with 5% LI. From SiS sample sizes (SaS) 15.10 5% with different LI, giving rise to 36 composite samples (CS) formed with 25, 20, 15 and 10 SiS were formed. The test was established with flour samples from 2 g wheat seed each sublot, SiS and CS. Both tests were established in polystyrene plates of 96 wells and reagents and protocols used were AGDIA®, DAS ELISA (2013) for WSMV and BSMV. The results obtained in this study indicated that the increase and the reduction of current sample size of 10% significantly affected (α = 0.05) the sensitivity of the ELISA test for the detection of WSMV and BSMV in samples of wheat flour. The sensitivity of the test to WSMV was low when the SiS were analyzed with all TM 20, 15, 8, 6 and 4% level of infection (LI) of 10%. This indicates that the LI natural wheat seed is an important consideration for WSMV detection by ELISA test. While the results for BSMV detection showed that by reducing the LI below 15% in the sublots, SiS and CS, is significantly affected (α = 0.05) the sensitivity of the ELISA to the virus. Likewise, the sensitivity of the test is affected significantly (α = 0.05), with decreasing the number SiS that forming a CS (<15 SiS), and the sample size. It is concluded that the level of natural infection of wheat seed sublots, single samples and composite samples is an important consideration for BSMV detection by ELISA test. Similarly, for the detection of this virus should also keep in mind the number of samples and sample size with which it is to form the composite sample.