Selección de cepas de hongos comestibles productoras de lacasas y su potencial de aplicación a procesos de biorremediación en zonas contaminadas con hidrocarburos en México

Abstract

Quince cepas de hongos comestibles pertenecientes a los géneros Pleurotus, Ganoderma, Lentinula y Coprinopsis, fueron evaluadas en cuanto a su actividad enzimática utilizando el medio de cultivo agar con extracto de malta (EMA), adicionado con ácido 2,2'–azino–bis–(3–etillbenzotiazolin–6–sulfónico) (ABTS), 2,6-dimetoxyphenol (DMP) y guayacol. Se seleccionaron nueve cepas para determinar cuantitativamente la actividad de lacasas. Esta evaluación se realizó con el medio de cultivo de extracto de malta líquido (EMB) suplementado con 0.1 mM de sulfato de cobre. Se demostró que las cepas CP-50 de Pleurotus ostreatus y CP-267 de P. pulmonarius son altamente productoras de actividad de lacasas, obteniéndose 4,000 U/ml y 2,500 U/ml, respectivamente. Estas cepas fueron considerablemente superiores en actividad de lacasas, con respecto a cepas de otras especies y géneros evaluadas (Ganoderma, Lentinula, Coprinopsis). Debido a que la cepa CP-50 presentó la mayor actividad de lacasas, esta fue utilizada en las pruebas de biorremediación in vitro, empleando el hidrocarburo aromático policíclico (HAP) antraceno (en polvo) directamente sobre el medio EMA. Se demostró que el micelio de la cepa CP-50 se desarrolló de manera normal aún en presencia de altas concentraciones de antraceno (0.1 g/25 ml), e incluso se observó un efecto de estimulación sobre su desarrollo. El método de evaluación desarrollado en este estudio demostró ser sencillo y eficiente, además de permitir la utilización de altas concentraciones de antraceno. Se propone una estrategia de biorremediación in situ para degradar hidrocarburos aromáticos policíclicos del petróleo, en suelos agrícolas contaminados, utilizando el sustrato residual de la producción comercial de hongos comestibles colonizado por micelio. _______________ SELECTION OF EDIBLE MUSHROOM STRAINS PRODUCING LACCASES AND ITS POTENTIAL FOR APPLICATION TO BIORREMEDIACIÓN PROCESSES IN CONTAMINATED AREAS WITH HYDROCARBONS IN MÉXICO. ABSTRACT: Fifteen Basidiomycete fungi belonging to the genera Pleurotus, Ganoderma, Lentinula and Coprinopsis were qualitatively evaluated using malt extract agar (EMA). 2-2´-azino-bis(3-ethylbenzothiazoline-6-sulphonic acid) (ABTS), 2,6-dimetoxyphenol (DMP) or guayacol substrate were added to the EMA medium. Nine strains were selected and quantitatively tested for laccase activity. Cupper sulfate (0.1 mM) added to the liquid malt extract (EMB) medium was used for this evaluation. High laccase activity was recorded in the strains CP-50 (4,000 U/ml) and CP-267 (2,500 U/ml) of Pleurotus pulmonarius. The genus Pleurotus showed higher laccase activity in comparison with the strains of the other genera studied (Coprinopsis, Ganoderma, Lentinula). The strain CP-50 was selected for further in vitro experiments using anthracene powder (0.1 g/25 ml) added to EMA. Data showed not only tolerance to the polycyclic aromatic hydrocarbon, but also promotion of mycelial growth. This method is useful for testing tolerance of fungi to other toxic compounds associated to bioremediation processes. A general strategy for using the spent substrate from commercial mushroom cultivation in Mexico for in situ bioremediation is discussed.