Aislamiento y caracterización de Streptococcus bovis y estudio inicial para el aislamiento de su bacteriófago

Abstract

El objetivo del presente estudio fue obtener un cultivo puro de la bacteria ruminal Streptococcus bovis a partir de líquido ruminal de ovinos alimentados con una dieta alta en sorgo (70 % en base seca). Además, se analizó su actividad fermentativa (producción de AGV y lactato) y el proceso de liofilizado como método de conservación, y se realizaron ensayos para expresar su bacteriófago. Para el aislamiento se usó un medio comercial para Streptococcus spp. (Merck) preparado bajo anaerobiosis. Para la identificación se usó el sistema API 20 Strep, reacción catalasa, morfología celular y tinción de Gram. Con la prueba API 20 Strep se comprobó que la bacteria aislada pertenece a la especie S. bovis. Esta bacteria tiene forma esférica a ovoide, de 0.8 a 1.5 !m de diámetro, es Gram positiva, no mótil, no forman esporas, catalasa negativo y se agrupa en pares o en cadenas de cuatro a ocho células. Su tiempo de generación en un medio a base de glucosa, celobiosa, almidón y fluido ruminal (GCA-FR) fue de 14 min. En medio GCA-FR, esta bacteria presentó una fermentación láctica-acética después de 4 h de incubación, con una producción de acetato, propionato, butirato y lactato de 17.48, 0.88, 0.54 y 39.93 mmol, respectivamente. La concentración total de la bacteria S. bovis fue de 25x1010/g y de 20x1010/g antes y después del proceso de liofilización; con una viabilidad bacteriana de 80 %, lo que permite concluir que el proceso de liofilizado es un excelente método de conservación. Se usó mitomicina (2 !g/ml de medio de cultivo) y cloroformo (1 mL/5 mL de medio) para inducir la expresión del bacteriófago contra S. bovis. Aunque se logro inducir unidades formadoras de placas (UFPL) con ambos reactivos, la mitomicina dio mejores resultados (1.4 x 104 UFPL/mL de medio de cultivo). Sin embargo, no siempre se logro inducir la fase lítica del bacteriófago, por tanto se sugiere evaluar una concentración mayor de mitomicina en los medios de cultivo._______The objective of this study was obtain a pure culture of the rumen bacteria Streptococcus bovis from the rumen liquid of lambs fed a high sorghum grain diet (70 % dry matter basis). Also, the fermentative activity (VFA and lactate production) the freeze dry process as method of bacteria conservation were analyzed and assays to express its bacteriophage were analyzed. A commercial medium for Streptococcus spp. (Merk) made under anaerobic conditions was used for isolation. The API 20 Strep, catalase reaction, cell morphology and Gram reaction were used for bacteria identification. It was confirmed that the isolated bacteria belongs to the species S. bovis with the API 20 Strep test. This bacterium is spherical or ovoid in shape, 0.8 to 1.5 !m in diameter, Gram positive, non motile, non sporing, catalase negative, occurring in pairs or in chains containing 4-8 cells. Its generation time was 14 min in a glucose, cellobiose, starch, and ruminal fluid medium (GCS-RF). After 4 h of incubation in GCS-RF medium this bacteria showed a lactate-acetate fermentation, with an acetate, propionate, butyrate and lactate production of 17.48, 0.88, 0.54 and 39.93 mmol, respectively. The S. bovis concentration was 25x1010/g and 20x1010/g before and after the lyophilization process; with 80 % of cell viability, it is concluded that the lyophilization process is an excellent method for conservation. Mytomicin (2!g/ml) and chloroform (1mL/5mL of culture medium) were used to induce the bacteriophage against S. bovis. With both reactives it was produced plaque forming units (PLFU), but mytomicin gave better results (1.4x104 PLFU/mL of culture medium). However, not always it was possible to induce the bacteriophage lytic phase, it is suggested to evaluate a high concentration of mytomicin in the culture medium.