| dc.description.abstract | El presente trabajo constituye el primer reporte sobre el estudio del sistema proteolítico
del hongo Moniliophthora roreri, agente causal de la moniliasis del cacao. El trabajo
inició con la identificación de la cepa aislada a partir de frutos de cacao infectados. La
amplificación y secuenciación de un fragmento del gen 18S rDNA, permitió la
identificación molecular de la cepa aislada como M. roreri, designada como MRO1. A
continuación, se evaluó el crecimiento celular de M. roreri en los medios de cultivo
líquidos mineral y V8 enriquecido, indicando que en este último se obtiene mayor peso
seco en mg mL-1. La determinación de los niveles de las actividades proteolíticas de
aspartil proteasa (mrAP), aminopeptidasa (mrAPE), carboxipeptidasa (mrCP) y
dipeptidil aminopeptidasa (mrDAP), fue evaluada siguiendo las cinéticas de producción
de proteasas desde las 0 hasta las 144h de incubación. Dichas determinaciones se
realizaron a partir de extractos enzimáticos obtenidos de la fracción intracelular y
extracelular empleando sustratos específicos. En ambos medios ensayados, se
encontró actividad enzimática intracelular y extracelular de mrAP, mrAPE, mrDAP y
mrCP las cuales podrían participar en diversos eventos celulares, y en el caso
específico de las proteasas extracelulares, podrían participar en la fitopatogénesis de
M. roreri. Los ensayos con diferentes inhibidores específicos, indicaron que es probable
que cada una de las actividades enzimáticas de mrAP, mrAPE, mrDAP y mrCP, sean
codificadas por múltiples genes, como se ha descrito en otros hongos. Los ensayos de
localización subcelular indicaron que a nivel intracelular las enzimas mrAPE y mrDAP
se encuentran asociadas mayoritariamente a la fracción citoplásmica, mientras que la
mrCP se encuentra asociada mayoritariamente a la fracción membranal, en ambos
medios de cultivo.__________The present work is the first report on the study of the protelic system of the
phytopathogenic fungus Moniliophthora roreri causing frosty pod rot (moniliasis
disease). The work beginning with the identification of the isolated strain from infected
cocoa pods. The amplification and sequencing of a fragment of the gene 18S rDNA,
allowed to the molecular identification of the isolated strain as M. roreri, designated as
MRO1. Later, the cellular growth of M. roreri was evaluated in mineral and enriched V8
liquid medium, indicating that in this last, one greater dry weight in mg mL-1 is obtained.
The determination of the levels of the proteolytic activities of aspartil protease (mrAP),
aminopeptidase (mrAPE), carboxypeptidase (mrCP) and dipeptidil aminopeptidase
(mrDAP), was evaluated following the kinetic production of proteases from the 0 to 144
h of incubation. These determinations were made from enzymatic extracts obtained of
the intracellular and extracellular fraction using specific substrates. In both tried media,
was intracellular and extracellular enzymatic activity in mrDAP mrAP, mrAPE, mrDAP
and mrCP, in M. roreri which could participate in diverse cellular events, and in the
specific case of the extracellular proteases, could participate in the pathogenesis
process. The tests with different specific inhibitors indicated that it is probable that each
one of the enzymatic activities of mrAP, mrAPE, mrDAP and mrCP, are codified by
multiple genes, since has been described in other fungi. The tests of subcellular location
indicated that at intracellular level the enzymes mrAPE, mrDAP are associate mainly to
the citoplasmic fraction, whereas mrCP is associate mainly to the membranal fraction, in
both means of culture. | es |
