El ácido acetilsalicílico como factor para generar aplicaciones biotecnológicas de Trichoderma con potencial en la agricultura

Abstract

Dentro del género Trichoderma existen diversas especies que son de importancia biotecnológica, usadas como agentes de biocontrol, para la producción de enzimas, antibióticos y en la biorremediación de suelos contaminados. Por otro lado, el ácido acetilsalicílico (AAS) se ha usado en la promoción de la respuesta del sistema inmune en plantas cultivadas y su uso en hongos resulta promisorio para estimular su desarrollo. En el presente estudio se evaluó el efecto del ácido acetil salicílico (AAS) en el crecimiento de diferentes especies de Trichoderma (T. harzianum, T. aggressivum f. aggressivum, T. pleuroti y T. atroviride) aisladas de substratos de cultivos de hongos comestibles. Se utilizaron dos concentraciones de AAS 1 y 100 µM y ABTS como sustratos enzimáticos. Se analizó la velocidad de crecimiento, área de la colonia, la actividad enzimática de lacasas y producción de esporas. Las cepas de Trichoderma fueron capaces de crecer en todos los tratamientos y el testigo. En todos los casos la adición del sustrato ABTS promovió la producción de lacasas y esporas. En el crecimiento se observó que únicamente la cepa de T. atroviride tuvo un estímulo con el sustrato de ABTS combinado con AAS 1 µM (Tx4), al presentar una colonización completa de la caja de Petri a los 7 de incubación. Las demás cepas no presentaron cambios en la velocidad de crecimiento y área de la colonia. La cepa T. atroviride demostró ser la única en presentar actividad de lacasas cualitativamente, al reaccionar con el sustrato ABTS y AAS en los tratamientos Tx3, Tx4 y Tx5 y coloreando el medio de cultivo, con una área de oxidación de 47.6 cm2, 57.1 cm2 y 48.9 cm2, respectivamente. El análisis de la actividad volumétrica de lacasas demostró que T. atroviride, presentó actividad obteniendo en el primer día el valor más alto con 0.58 U mL-1. Las demás cepas demostraron un efecto estimulante en la producción de lacasas, con los tratamientos de AAS y ABTS, siendo el tratamiento Tx3 (ABTS) el que provocó en T. pleuroti el valor más alto en la producción de lacasas con 1.48 U mL-1. Se observó que en los primeros días existió una estimulación con el tratamiento de Tx2 (AAS 100 µM) en T. pleuroti con una actividad de 1.18 U mL-1, mientras que T. harzianum y T. aggressivum f. aggressivum lo hicieron con Tx1 obteniendo 1.2 U mL-1y 1.3 U mL-1, respectivamente. La producción más alta de esporas fue en el tratamiento Tx4 en la cepa de T. pleuroti, con una producción de 5.95 x 106 esporas mL-1. La dosis más alta de AAS (100 µM), promovió la producción de esporas en dos cepas, T. harzianum y T. aggressivum f. aggressivum, con 3.5 x 106 y 6.3 x 105 esporas mL-1 en comparación con los testigos que fueron de 3.0 x 106 y 3.3 x 105 esporas mL-1, respectivamente; sin embargo, esta condición afectó la producción de esporas en la cepa CPM-121 de T. atroviride al obtener únicamente 7.75 x 105 esporas mL-1 comparada con su testigo que obtuvo 1.05 x 106 esporas mL-1. A partir de los resultados obtenidos es factible planear una estrategia que involucre aplicaciones biotecnológicas de estas cepas de Trichoderma, encaminadas al área agrícola. _______________ ACETYLSALICYLIC ACID AS A FACTOR TO GENERATE BIOTECHNOLOGY APPLICATIONS OF Trichoderma WITH POTENTIAL IN AGRICULTURE. ABSTRACT: Within the genus Trichoderma there are different species of biotechnological importance, such as those used as biocontrol agents, for enzyme production, antibiotics and for bioremediation. On the other hand, acetylsalicylic acid (ASA) has been used in promoting the immune response in cultivated plants and their use in mushrooms to stimulate the development is promising. In the present study the effect of acetylsalicylic acid (ASA) in the growth of different species of Trichoderma (T. harzianum, T. aggressivum f. aggressivum, T. pleuroti and T. atroviride) isolated from edible mushrooms substrates were evaluated. Two concentrations of ASA 1 and 100 µM plus ABTS as enzymatic substrate were used. Growth rate, colony area, the enzymatic activity of laccases and spore production were analysed. Trichoderma strains were able to grow in all treatments and in the control. In all cases the addition of ABTS promoted the production of laccases and spores. In the growth rate it was observed that only the strain of T. atroviride was stimulated by the ABTS combined with ASA 1 µM (Tx4) showing a complete colonization of the petri dish in 7 days. In the case of other strains there were no changes in growth rate or colony area. T. atroviride strain proved to be the only to show qualitative laccase activity by colouring the culture medium in treatments Tx3, Tx4 and Tx5 in day 7 with an oxidation area of 47.6 cm2, 57.1 cm2 and 48.9 cm2, respectively. The volumetric analysis of laccase activity exhibited that T. atroviride was capable to produce laccase in the first day the highest value with 0.58 U mL-1. All other strains showed a stimulatory effect on the production of laccases with AAS and ABTS, being treatment Tx3 (ABTS) in T. pleuroti obtaining the highest value in the production of laccases with 1.48 U mL-1. It was observed that in the first day there was a stimulation in treatment Tx2 (ASA 100 μM) in T. pleuroti with a production of 1.18 U mL-1, while T. harzianum and T. aggressivum f. aggressivum did it with treatment Tx1 with 1.2 U mL-1and 1.3 U mL-1, respectively. The highest spore production was obtained in the treatment Tx5 in T. pleuroti, with 5.95 x 106 spores mL-1. The highest doses of ASA (100 µM) promoted spore production in two strains, T. harzianum and T. aggressivum f. aggressivum with 3.5 x 106 and 6.3 x 105 spores mL-1 compared to the control with 3.0 x 106 and 3.3 x 105 spores mL-1, respectively; however, this condition affected the production of spores in T. atroviride obtaining 5.62 x 105 spores mL-1 compared to the control with 9.87 x 105 spores mL-1. From the results it is feasible to plan a strategy involving biotechnological applications of these strains of Trichoderma in the agricultural area.