Caracterización de cepas infectivas de hongos entomopatógenos que no presentan actividd quitinolítica.

Abstract

Cinco cepas de dos especies de hongos entomopatógenos (Metarhizium anisopliae y Beauveria bassiana) con infectividad comprobada hacia insectos, fueron evaluadas en su capacidad para producir enzimas extracelulares con actividad quitinolítica. Se obtuvieron las proteínas extracelulares de dichas cepas en tres condiciones de crecimiento; medio rico específico, medio mínimo y medio mínimo suplementado con quitina coloidal como inductor. Mediante un ensayo enzimático colorimétrico se evaluó la capacidad de las proteínas extracelulares para hidrolizar tres sustratos diferentes con lo cual se pudo determinar las acitivades de chitobiosidasas, B-N-acetilglucosaminidasa y endoquitinasa. Asimismo, las proteínas secretadas al medio fueron precipitadas con ácido tricloroacético, cuantificadas espectrofotométricamente midiendo la absorbancia a 280nm y analizadas mediante electroforesis en gel de poliacrilamida en condiciones desnaturalizantes (SDS-PAGE).. Bioensayos en contra del ácaro Tetranychus urticae fueron realizados para establecer correlación entre producción de quitinasas e infectividad. Las cepas Bb005 de B. bassiana y Ma005 y Ma008 de M. anisopliae, no presentaron actividad quitinolítica. Las cepas de B. bassiana Bb017 y Bb019 presentan actividad de quitinasa, exoquitinasa y endoquitinasa. Los resultados de actividad enzimática y producción de enzimas extracelulares, mostrron que la condición de crecimiento en medio rico definido no favorece la producción de enzimas y bajo las condiciones a las que se sometieron las cepas presentan diferencias en la producción de proteínas. Los resultados obtenidos de los bioensayos, sugieren que la ausencia en la producción de quitinasas no está relacionada con la agresividad de estas cepas. _______________ CHARACTERIZATION OF FIVE ENTOMOPATHOGENIC FUNGUS STRAINS WITHOUT CHITINOLITIC ACTIVITY. ABSTRACT: Five strains of two entomopathogenic fungi (Metarhizium anisopliae and Beauveria bassiana) were evaluated on its ability to produce extracellular enzymes with chitinolitic activity. Extracellular proteins were obtained in three conditions; specific growth medium, minimal medium and minimal medium supplemented with colloidal chitin as an inducer of the synthesis of chitinases. Total extracellular proteins were precipitated with trichloroacetic acid, quantified specrophotometrically and analyzed by SDS-polyacrylamide gel electrophoresis. Specifc activity in the three growth conditions was measure by colorimetric assay using three different substrates to detect chitobiosidase, b-N-acetylglucosaminidase and endochitinase activities. Bioassays were carried out against Tetranychus urticae to stablished if exist a correlation between chitinases presence and infectivity of the M. anisopliae and B. bassiana strains. The strains Bb005 (B. bassiana) and Ma005, Ma008 (M. anisopliae) did not present chitinolitic activity in enzymatic assays while Bb017 and Bb019 (B. bassiana) strains showed chitinase, exochitinase and endochitinase activity. Together the results of enzymatic activity and production of extracellular enzymes suggest that the growth condition in rich defined medium does nor favor the production of chitinolytic enzymes under the three different conditions that were evaluated, the strains show differences in proteins production. According to the bioassays results on these strains there are no correlation between the chitinases production with the aggressiveness.